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原代細(xì)胞與細(xì)胞系的培養(yǎng)區(qū)別

首先我們需要區(qū)分原代細(xì)胞和細(xì)胞系的概念：

原代細(xì)胞(primary cell)是指從機(jī)體的組織(如人組織、小鼠組織、兔組織等)經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得單個(gè)細(xì)胞并在體外進(jìn)行模擬機(jī)體培養(yǎng)的細(xì)胞。

細(xì)胞系(cell line)是原代細(xì)胞經(jīng)首次傳代成功后即為細(xì)胞系。其中能夠連續(xù)傳代的細(xì)胞叫做連續(xù)細(xì)胞系或無(wú)限細(xì)胞系，不能連續(xù)培養(yǎng)的稱為有限細(xì)胞系。人類(lèi)腫瘤細(xì)胞，在體外培養(yǎng)半年以上，生長(zhǎng)穩(wěn)定，并連續(xù)傳代的即可稱為連續(xù)性株或系。

原代細(xì)胞培養(yǎng)之組織取材

原代細(xì)胞最接近和最能反映體內(nèi)生長(zhǎng)特性，適宜用于藥物敏感性試驗(yàn)、細(xì)胞分化等實(shí)驗(yàn)研究。

部位

方法

皮膚和黏膜

主要取皮片，面積一般2-4cm2

內(nèi)臟和實(shí)體瘤

? 無(wú)菌環(huán)境；

? 熟悉所需組織的類(lèi)型和部位；

? 要避開(kāi)破潰、壞死、液化部分，以防污染、盡量去除混雜的結(jié)締組織。

血液細(xì)胞

? 一般多抽取靜脈外周血、或從淋巴組織中分離細(xì)胞；

? 取材時(shí)應(yīng)注意抗凝。

骨髓、羊水、胸/腹水細(xì)胞

嚴(yán)格無(wú)菌、注意抗凝、還要盡快分離培養(yǎng)、離心后，用無(wú)鈣、鎂PBS洗兩次，再用培養(yǎng)液洗一次后即可培養(yǎng)，不宜低溫存放。

動(dòng)物組織取材-鼠胚組織

? 用引頸或氣管窒息致死法處死孕期合適的動(dòng)物；

? 將其浸泡在含75%酒精的燒杯中，5分鐘后取出動(dòng)物；

? 在消毒過(guò)得木板上可用無(wú)菌的圖釘固定四肢，切開(kāi)皮膚；

? 用無(wú)菌操作法解剖取胚。

動(dòng)物組織取材-幼鼠胚腎/肺

? 幼鼠采用上述方法處死消毒后；

? 腹部朝上固定在木板上，先切開(kāi)游離毛皮并拉開(kāi)至兩側(cè)；

? 采用無(wú)菌法打開(kāi)胸腔取肺，或從背部打開(kāi)腹腔取腎。

原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法

組織塊培養(yǎng)法：

將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶（或皿）中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。

消化培養(yǎng)法：

該方法是源于消化分散法，將妨礙細(xì)胞生長(zhǎng)的細(xì)胞間質(zhì)（包括基質(zhì)、纖維等）去除，使細(xì)胞分散形成細(xì)胞懸液，然后分瓶培養(yǎng)。

懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法：

對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、和免疫細(xì)胞等無(wú)需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

器官培養(yǎng)：

從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，其特性仍保持原有器官細(xì)胞的組織結(jié)構(gòu)和聯(lián)系、并能存活。

注意事項(xiàng)：

注意事項(xiàng)

1. 培養(yǎng)液和培養(yǎng)物的比例：一定濃度的培養(yǎng)物僅能支持一定數(shù)量的細(xì)胞生長(zhǎng)，不能盲目增加每單位體積的細(xì)胞濃度。

2. pH：初培養(yǎng)pH應(yīng)為7.4，培養(yǎng)過(guò)程中應(yīng)不低于7.0。

3. 培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的空間：一般培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)液與液面上的空間體積之比為1:10。

細(xì)胞系培養(yǎng)

細(xì)胞系常見(jiàn)生長(zhǎng)方式分為貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞

貼壁細(xì)胞	懸浮細(xì)胞
適合包括原代細(xì)胞在內(nèi)的大多數(shù)細(xì)胞類(lèi)型。	適用于已適應(yīng)懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞和其他一些無(wú)粘附性的細(xì)胞。
需要定期傳代，但易于在倒置顯微鏡下進(jìn)行目視檢驗(yàn)。	較易傳代，但需要每天進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和存活率測(cè)定，以遵循生長(zhǎng)方式;可將培養(yǎng)物稀釋以刺激生長(zhǎng)。
采用酶法或機(jī)械方法解離細(xì)胞。	無(wú)需通過(guò)酶法或機(jī)械方法解離細(xì)胞
細(xì)胞生長(zhǎng)受到表面積限制，從而可能限制細(xì)胞產(chǎn)量。	細(xì)胞生長(zhǎng)受到培養(yǎng)基中細(xì)胞濃度的限制，易于擴(kuò)大規(guī)模培養(yǎng)
需要使用經(jīng)過(guò)組織培養(yǎng)處理的容器。	可在未經(jīng)組織培養(yǎng)處理的培養(yǎng)容器中進(jìn)行培養(yǎng)，但需要攪動(dòng)以便進(jìn)行充分的氣體交換
可連續(xù)收獲產(chǎn)物，用于細(xì)胞學(xué)研究等多種研究應(yīng)用	可批量收獲產(chǎn)物，用于批量生產(chǎn)等多種研究應(yīng)用

懸浮細(xì)胞傳代步驟

直接傳代法

1、待懸浮細(xì)胞長(zhǎng)滿至80%～90%（細(xì)胞懸液變黃），即可傳代；

2、用吸管吸棄細(xì)胞懸液 1 /2～1 / 3；

3、加入適量的新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。

離心傳代法（在發(fā)現(xiàn)有細(xì)胞碎片的情況下）

1、將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)；

2、150 g 離心 5 min，棄去上層清液；

3、使用新鮮的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；吸管吸取適量細(xì)胞懸液，裝入新的培養(yǎng)瓶，再加入適量的新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。

貼壁細(xì)胞傳代步驟

清洗—消化—終止—標(biāo)記

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